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天津本生帶您了解細胞凍存的具體步驟!
細胞凍存是將細胞放在低溫環境,減少細胞代謝,以便長期儲存的一種技術。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一,起到了細胞保種的作用。下面看下BUNSEN本生小編的詳解:
1、配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養液;
2、取對數生長期的細胞,去除舊培養液,用PBS清洗。
3、去除PBS,加入適量胰蛋白酶(覆蓋培養皿表面)把單層生長的細胞消化下來;
4、離心1000rpm,5min;
5、去除胰蛋白酶,加入適量配制好的凍存培養液,用吸管輕輕吹打使細胞均勻,計數,調節凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml~1×107/ml;
6、將細胞分裝入凍存管中,每管1~1.5 ml;
7、在細胞凍存管上標明細胞的名稱,凍存時間及操作者;
8、凍存:標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/ min;當溫度達-25℃以下時,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時,則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中過夜,取出凍存管,移入液氮容器內。
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